なぜPCRでネガティブコントロールを使用するのですか?

なぜPCRでネガティブコントロールを使用するのですか?
Anonim

回答:

下記参照

説明:

PCRは鋳型DNAから機能する。 HIVの検査をしているとしましょう(HIVはRNAウイルスですが、細胞に侵入するとDNAに変わります。したがって感染細胞にはHIV DNAが存在します)。あなたが使用するプライマーは、HIV DNAの一部に対応する産物(アンプリコン)を作ります。あなたがこのアンプリコンを見れば、あなたは現在HIV配列を持っています…..あなたがネガティブコントロールを持っていなければ、あなたは汚染があるかもしれません。

PCRは非常に敏感です。 PCRには多くの溶液(水、緩衝液、dNTP、酵素)が使用されていますが、それらのすべてが他のサンプルからのDNA、あるいは昨日行った反応で作られたアンプリコンからさえも簡単に汚染される可能性があります。ですから、あなたが患者XのDNAサンプルを持っていて、PCRでHIVをチェックしている場合、PCRプライマーは患者XのDNAサンプルのHIV DNAから生成物を作り出すかもしれません。汚染。しかし、それが患者のDNAの汚染によるものなのか、HIVによるものなのかはわかりません。

だからあなたは水管理を実行します。 1本目のチューブに反応の全成分を入れ、DNAには水を加えるだけです。これはネガティブコントロールです。何もここで増幅する必要があります。チューブ2に、すべての反応成分と患者XのDNAを入れます。あなたがここで製品を手に入れるならば(そして、Tube 1には何も)、患者Xはおそらく彼/彼女のDNAにHIV DNAを持っています。あなたがTube 1とTube 2の両方で製品を手に入れた場合、あなたは汚染の問題を抱えており、そしてあなたは患者のサンプル中のHIVが病気に由来するのか汚染に由来するのかを見分けることができません。

それであなたはいつも水管理を実行します(DNAの代わりに水)。