なぜGAPDHがウエスタンブロットに使われるのですか? +例

なぜGAPDHがウエスタンブロットに使われるのですか? +例
Anonim

回答:

GAPDHはローディングコントロールとしてよく使用されます。

説明:

ウエスタンブロッティングでは、ローディングコントロールとしてGAPDHをよく使用します。これが意味するのは、GAPDHを調べることにより、ブロットの異なるレーンに等量のタンパク質がロードされていることを確認できるということです。

使用例 - 細胞内の特定のタンパク質の上昇を引き起こすと私たちが考えている病気があるとしましょう。 「健康な」細胞からサンプルを作り、「病気の」細胞からサンプルを作ります。その後、ウェスタンブロットのために、等量の両サンプルをゲルにロードします。

関心のあるタンパク質についてブロットを調べた後、我々は、罹患細胞においてタンパク質レベルが実際に上昇している(すなわち、より暗いバンドがブロット上に生成される)ことを見いだした。このタンパク質の増加は、ローディングアーチファクトではなく、細胞内の発現の変化によるものであることを証明する(つまり、より強いバンドは、細胞内のタンパク質発現の変化によって引き起こされ、誤ってより多くの細胞をローディングすることによるものではない「健康な」サンプルよりも「病気の」サンプルの場合は、GAPDHについてブロットをプローブして、総タンパク質レベルが両方のレーンで同じであることを示します。

したがって、これを行うことによって、同等のタンパク質が2つのレーンにロードされていること、および観察しているバンド強度の変化が目的のタンパク質のタンパク質発現の変化によることを示しています。