なぜエリザを確認するためにウエスタンブロットが使われるのですか? +例

なぜエリザを確認するためにウエスタンブロットが使われるのですか? +例
Anonim

回答:

典型的にはこれは抗体特異性試験である。

説明:

ELISAでは、抗体が目的のタンパク質、完全に異なるタンパク質、またはある範囲のタンパク質に結合しているかどうかを判断するのは非常に困難です。

ウエスタンブロットは抗体の特異性をチェックするために使用されます(あなたはウエスタンブロットが間違ったタンパク質とのすべての交差反応を検出しないかもしれないことに注意するべきです)。

ウエスタンブロットでは、抗体が結合しているタンパク質のサイズを見ることができます(ELISAではできません)。したがって、たとえば、抗体が56 kDaのタンパク質に結合していて、ブロット上に約56 kDaのバンドが見える場合は、その抗体が正しいタンパク質に結合していると合理的に確信できます。

一方、32 kDaのバンドを見た場合、その抗体は間違ったタンパク質に結合していると結論付けることができます。同様に、多くのバンドがウエスタンブロット上に現れたならば、それは抗体がある範囲の異なるタンパク質に結合していたことを(タンパク質分解の非存在下で)示唆するだろう。

ゲル上に現れる32kDaのバンド、および複数のバンドの例では、抗体がELISAに対する特異性を欠いていること、およびELISAにおいて見られるいかなる結果も目的のタンパク質に特異的ではない可能性があることが示唆される。

この種のテストを実行した場合は、抗体をテストするためのある種の「干渉」試薬を含めることができます。例えば、私が自分の抗体をペプチドに対して産生させた場合、正しい結合について試験するために一次抗体溶液中にそのペプチドを含めることができる。すなわち、ペプチドの存在下では、私の一次抗体は過剰のペプチドの存在のために結合することができないので、ELISAからのバンドも結果も見られないはずである。