回答：
たくさんの…
説明：
バンドがウエスタンブロットに表示されない理由はたくさんあります。サンプルと抗体の組み合わせは過去に機能しましたか？
以下はバンドが現われない原因となるかもしれない現時点で考えることができるほんの一部です：
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タンパク質はゲルから移動しましたか？バンドが存在するかどうかを確認するためにポンソーSやアミドブラックのようなもので膜を染色してみてください。時々、あなたはそれを濡らしてそれを光に対して斜めに保持することによって膜上のタンパク質バンドを見ることができます。
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一次抗体は機能していますか？これはテストするのが難しいので、目的のタンパク質が存在することがわかっている場合にポジティブコントロールを含めることが唯一の方法です。目的のタンパク質がある場合は、それをウエスタンブロッティングメンブレンにスポットして（つまり、ゲルを流さないで）、メンブレンをウエスタンブロットのように処理しても結果が得られるかどうかを確認してみてください。
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二次抗体は一次抗体を認識していますか？繰り返しますが、テストするのは難しいです。あなたができる唯一のテストについては、2で前述したスポットテストです。
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「検知システム」は機能していますか？使用している検出方法によっては、二次抗体の一部をスパイクして、検出溶液、および二次抗体のトリガー剤/酵素が機能しているかどうかを確認することもできます。つまり、二次抗体だけで反応を引き起こすことができますか？
最後に、プロットのプロービング中に使用された解決策の1つが誤って構成されているのと同じくらい簡単な場合があります。例えば、塩濃度が緩衝液中で間違っているならば、これは抗体をブロットから放出させるかもしれない。緩衝液のpHが不正確であっても同じことが起こります。
私が個人的に経験したことがない西洋のしみが機能しない「最も奇妙な」原因は、私たちがメンブレンをブロックするために使用していた粉ミルクの供給元を変更したときでした。新しい供給業者からの粉末はホスホチロシンホスファターゼを含み、それは我々が我々の抗ホスホチロシン抗体で検出しようとしていた全てのリン酸基を除去した。