ELISA検査で、一次抗体と二次抗体は何をするのですか?

ELISA検査で、一次抗体と二次抗体は何をするのですか?
Anonim

回答:

それはELISAアッセイの種類に依存する。

説明:

ELISA 酵素結合免疫吸着検定法。

ELISAアッセイにはさまざまな種類があります。あなたが必要としているのは、

  • 酵素が結合した抗体
  • 抗体が結合する抗原
  • 測定可能な反応を引き起こす酵素の基質

酵素 抗体に結合しているのはしばしばHRP(セイヨウワサビペルオキシダーゼ)である。 HRPは、色を変えるかまたは光を発する(どちらも測定可能な)異なる基質と反応することができる。

画像は、 他の種類 ELISAアッセイそれらがどのように動作するかを説明します。

直接ELISA

プレートを抗原(Ag)でコーティングし、 一次抗体 酵素と一緒に追加されます。基質を添加すると反応が起こり、抗体 - 抗原相互作用の量に比例します。

間接ELISA

やはり、プレートは抗原でコーティングされている。 一次抗体 抗原に結合します。 A 二次抗体 最初の抗体に結合するが追加されます。二次抗体は基質と反応する酵素を含む。

サンドイッチELISA

ここでは2つか3つの抗体が関係しています。捕捉抗体はプレートに付着して抗原に結合する。これには、直接法(1抗体のみ)または間接法(2抗体)と同じステップが続きます。

競合ELISA

阻害ELISAと呼ばれることもあり、もう少し複雑です。プレートを研究対象の抗原でコーティングする。 A 一次抗体 酵素を含む試料を、未知の濃度の同じ抗原を含む試料と最初にインキュベートする。次いでこれをプレートに添加し、それでもなお遊離している抗体をプレート上の抗原と反応させることができる。試料の抗体 - 抗原複合体を洗い流した後、基質を添加する。

未知のサンプルに大量の抗原が含まれている場合、プレートに結合するのに自由な抗体が少なくなります=シグナルが低くなります。